DNase I是什么？简单来说，DNase I（DNA酶I），是核酸内切酶，专职“拆解”DNA分子。它属于脱氧核糖核酸酶家族，主要作用是水解DNA的磷酸二酯键，将长链DNA切割成短小的寡核苷酸片段。这些片段通常带有5′-磷酸基团，便于后续实验或生物过程的进行。DNase I可用于一系列分子生物学应用，包括RNA提取、建库、逆转录，以及RT-qPCR、体外转录等实验，本篇将带大家认识下这款酶~

DNase I的作用原理

DNase I可消化单链或双链DNA，通常来源于牛胰腺。其原理是通过水解磷酸二酯键生成含 5′-磷酸基团和 3′-OH基团的单脱氧核苷酸/寡核苷酸片段。它的作用机制涉及两个主要步骤：（1）与底物进行非特异性结合。（2）进行水解反应。

图.DNase I作用原理图

DNase I的活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘性末端。

图.DNase I在不同离子环境下对底物的切割

DNase I的发展史

传统上，DNase I主要从牛胰腺中提取，即“牛源DNase I”。牛胰腺富含这种酶，因为它在动物消化系统中帮助分解摄入的DNA。但随着生物技术的进步，研究人员通过基因工程在细菌（如大肠杆菌）或酵母中表达人源或牛源序列，生产出“重组DNase I”（rDNase I）。相比较牛胰腺提取的DNase I来说，重组DNase I避免了动物源风险，在纯度、活性、稳定性、安全性等多方面更胜一筹。

DNase I的主要应用

1.RNA样品处理与qPCR体系去除DNA残留

RNA制备过程中常常混入基因组DNA，这会影响下游转录组测序或实时定量PCR的准确性。DNase I是清除RNA制备体系中DNA污染的“标准工具”，通过短时孵育即可降解污染DNA，而对RNA无影响。

2.DNase I足迹分析

利用DNase I在自由DNA上随机切割，而在蛋白质结合区域无法切割的特性，通过在电泳自显影图中观察蛋白“保护区”产生的酶切缺失带（Footprint），从而精确定位DNA—蛋白质结合位点。

3.体外转录去除模板DNA

体外转录（IVT）主要是以DNA为模板，加上对应的底物和缓冲液通过体外转录得到RNA。在体外转录实验中，合成后的RNA可能会有DNA残留，消除DNA残留可以减少下游纯化难度并增加产品的纯度。

4.缺口平移法进行DNA标记

缺口平移法，是实验室最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法。该方法是DNase I与E.coli DNA Polymerase I的联合作用实现的。

5.细胞分散辅助

在组织消化或原代细胞制备过程中，DNase I可水解细胞破裂释放的黏稠DNA，减少细胞团聚，提升单细胞制备效率与细胞培养成功率。

6.TUNEL检测对照

细胞凋亡TUNEL检测中，可使用DNase I处理细胞或组织样本，以人为制造DNA断裂，作为阳性对照用于方法学验证。

金普诺安|重组DNase I

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本产品是通过重组DNA技术，在毕赤酵母（Pichia pastoris）​​中高效表达的重组牛胰腺脱氧核糖核酸酶I（Recombinant Bovine DNase I，也称重组DNA酶I（牛源））。该酶是一种核酸内切酶，能够水解单链或双链DNA中的磷酸二酯键，产生带有5’-磷酸末端的单核苷酸或寡核苷酸混合物。与传统的动物组织提取来源的DNase I相比，本产品具有纯度极高、无动物源病原体污染、批次间稳定性好等突出优点。

产品特点

数据指标

无RNase残留

分别将空白组、DNase l与底物RNA孵育，比较琼脂糖凝胶电泳图变化。结果显示金普诺安DNase l无RNase残留。

图：RNase残留检测

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